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4%多聚甲醛固定液
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4%多聚甲醛固定液(4% Paraformaldehyde Fix Solution, 4% PFA Fix Solution)是一种广泛用于免疫组化
(Immunohistochemistry, IHC)、免疫荧光(Immunofluorescence, IF)、免疫细胞化学(Immunocytochemistry, IC)、流式分析(Fluorescence-activated cell sorting, FACS)等检测时组织、组织切片、细胞等生物样品固定的溶液。本产品配制在PBS溶液中,可直接用于组织或细胞的固定,无需稀释。若需使用低浓度多聚甲醛,可使用PBS按比例稀释。
组织学上,4%的多聚甲醛穿透力强,固定均匀,能使组织硬化,有利于切片。该固定剂造成的组织收缩少,损伤小,较为温和,能很好的保存固有物质,保持组织的抗原性和细微结构。此外,多聚甲醛可用于固定并保存脂肪及脂类物质。
本产品固定效果好、应用广,适用于各种常见细胞或组织的固定,对皮肤、肌肉、内脏等均有良好的固定效果,但主要作用于蛋白质,无法固定尿酸和糖类等。
固定液可使细胞或组织的蛋白质凝固,终止内源性或外源性酶反应,防止组织自溶或异溶,以保持原有结构和形态。对免疫组化而言更有原位保存抗原的作用,避免抗原失活或弥散。固定液种类很多,常见的有多聚甲醛、甲醛、戊二醛、乙醇、丙酮等。其固定原理不同,各有优缺点。目前在科学研究中多聚甲醛应用最广,通过形成分子间的交联从而使细胞或组织的三维结构得以被固定。多聚甲醛是甲醛的聚合物,性质比甲醛稳定,且对抗原的破坏能力弱于甲醛,因此,科学研究中常用多聚甲醛作为固定剂。
本产品经反复测试,可以很好的适用于IHC、IF、IC和FACS等相关检测时样品的固定。
按照每个样品固定时需要1毫升固定液计算,一个包装的本产品可以固定100个或500个样品。
包装清单:
产品编号
产品名称
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4%多聚甲醛固定液
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-20℃保存,一年有效。4℃保存,一个月有效。
注意事项:
本产品放置过久其中的醛基可能会被氧化为酸,使溶液pH降低,从而影响染色。
不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
多聚甲醛虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过24小时。
多聚甲醛可长期存在于固定过的细胞或组织样品中,固定完成后用适当的洗涤液或水冲洗数小时仍会有残留,因此后续实验结果如果受醛基影响,须尽量洗去残留的多聚甲醛。
醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,4%多聚甲醛固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。
本产品对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. 对于细胞样品,去除培养液后,按照每六孔板一个孔加入1毫升固定液的比例,加入4%多聚甲醛固定液。对于细胞涂片等其它细胞样品,加入固定液的量以充分盖住样品为准。通常室温固定10-20分钟即可,但固定较长时间,例如1-2小时也是可以的。后续需使用适当的洗涤液充分洗涤以去除残留的多聚甲醛。
2. 对组织切片,加入4%多聚甲醛固定液量以充分覆盖切片为准,或使用染色架进行固定。通常室温固定10-20分钟即可完成固定,但切片较厚时可以固定较长时间,例如1-2小时。后续需使用适当的洗涤液充分洗涤以去除残留的多聚甲醛。
3. 对于组织块样品,浸泡入4%多聚甲醛固定液中,室温或4℃浸泡固定2到24小时。建议不超过8小时,除非组织块特别大,难以渗透。固定完成后,放入装有蒸馏水的离心管中清洗,每15-30分钟换一次水,共6-8次,建议在摇床进行,或用流水冲洗1-2小时。随后梯度脱水,进行包埋。如果暂时不包埋可放入70-75%的酒精中保存。
4. 详细的免疫染色操作可以参考我们的相关网页:http://www.beyotime.com/support/immunol-staining.htm。
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免疫染色固定液(Saponin)
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P0097-500ml
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4%多聚甲醛固定液
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免疫细胞化学常用试剂中的10种固定液 - 知乎
免疫细胞化学常用试剂中的10种固定液 - 知乎切换模式写文章登录/注册免疫细胞化学常用试剂中的10种固定液冉盛网大多数神经激素、肽类物质为水溶性,在用于免疫细胞化学研究之前,常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同,因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此,在进行免疫细胞化学研究之前,很有必要了解所要研究的物质(蛋白质或肽类)的化学性质,并根据需要来选择适宜的固定剂(或固定方法)以及改进固定条件。目前,免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂,其中以甲醛类和戊二醛最为常用。今天给大家简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂。1、4%多聚甲醛-0.1mol/L 磷酸缓冲液(pH7.3) 试剂:多聚甲醛 40g0.1mol/L 磷酸缓冲液 至1000ml配制方法:称取40g 多聚甲醛,置于三角烧瓶中,加入500~800ml 0.1mol/L 磷酸缓冲液(Phosphate Buffer 以下简称PB),加热至60℃左右,持续搅拌(或磁力搅拌)使粉末完全溶解,通常需滴加少许 1n NaOH 才能使溶液清亮,最后补足0.1mol/L 的PB于1000ml,充分混匀。该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究,最好是动物经灌注固定取材后,继续浸泡固定2~24h。另外,该固定剂较为温和,适于组织标本的较长期保存。2、4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠试剂:A 液:多聚甲醛 40g 蒸馏水 400mlB 液:Na2HPO4·2H2O 16.88g蒸馏水 300mlC 液:NaOH 3.86g蒸馏水 200m配制方法:A 液最好在500ml 的三角烧瓶中配制(方法同前),至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意,在溶解多聚甲醛时,要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B 液和C 液配制好后,将B 液倒入C 液中,混合后再加入A 液,以1n NaOH 或1N HCl 将pH 调至7.2~7.4,最后,补充蒸馏水至1000ml 充分混合,4℃冰箱保存备用。该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究,用于免疫电镜时,最好加入少量新鲜配制的戊二醛,使其终浓度为0.5%~1%。该固定剂较温和,适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中,4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。3、Bouin’s 液及改良Bouin’s 液试剂:饱和苦味酸40%甲醛 250ml冰醋酸 50ml配制方法:先将饱苦味酸过滤,加入甲醛(有沉淀者禁用),最后加入冰醋酸,混合后存于4℃冰箱中备用。冰醋酸最好在临用前加入。改良 Bouin’s 液即不加冰醋酸。该固定液为组织学、病理学常用固定剂这一,对组织的穿透力较强,固定较好,结构完整。但因偏酸(pH 为3~3.5),对抗原有一定损害,且组织收缩较明显,故不适于组织标本的长期保存。此外,操作时,应避免吸入或与皮肤接触。4、Zamboni’s(Stefanini’s)液试剂:多聚甲醛 20g饱和苦味酸 150mlKarasson-Schwlt’s PB 至1000ml配制方法:称取多聚甲醛20g,加入饱和苦味酸150ml,加热至60℃左右, 持续搅拌使充分溶解、过滤、冷却后,加Karasson-Schwlt’s PB 至1000ml 充分混合(Karasson –Schwlt’s 磷酸缓冲液的配制配制方法见后)。该固定液适于电镜免疫细胞化学,对超微结构的保存较纯甲醛为优,也适于光镜免疫细胞化学研究,为实验室常用固定剂之一。我们在应用中,常采用2.5% 的多聚甲醛和30%的饱和苦味酸,以增加其对组织的穿透力和固定效果,保存更多的组织抗原。固定时间为6~18h。5 、PLP 液 PLP 液 即 过 碘 酸 盐- 赖 氨 酸- 多 聚 甲 醛 固 定 液(Periodate-Lysine-paraform-alde-hyde fixative)试剂:过碘酸钠赖氨酸盐酸盐(或盐酸赖氨酸):多聚甲醛蒸馏水配制方法:(1)贮存液A(0.1mol/L 赖氨酸-0.5mol/l Na3PO4,pH7.4):称取赖氨酸盐酸盐1.827g 溶于50ml 蒸馏水中,得0.2mol/L 的赖氨酸盐酸盐溶液,然后加入Na2HPO4 至0.1mol/L,将pH 调至7.4,补足0.1mol/L 的PB 至100ml,使赖氨酸浓度也为0.1mol/L,4℃冰箱保存,最好两周内使用。此溶液的渗透浓度为300mOs mmol/L/kg。(2)贮存液B(8%多聚甲醛溶液):称8g 多聚甲醛加入100ml 蒸馏水中,配成8%多聚甲醛液(方法见前)。过滤后4℃冰箱保存。(3)临用前,以3 份A 液与1 份B 液混合,再加入结晶过碘酸钠(NaIO4),使NaIO4 终浓度为2%。由于AB 两液混合,pH 从约7.5 降至6.2,故固定时不需再调pH 值。固定时间为6~18h。该固定剂较适于富含糖类的组织,对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。其机制是借助于过碘酸氧化组织中的糖类形成醛基,通过赖氨酸的双价氨基与醛基结合,从而与糖形成交联。由于组织抗原绝大多数都是由蛋白质和糖两部分构成,抗原决定簇位于蛋白部分,故该固定剂有选择性地使糖类固定,这样既稳定了抗原,又不影响其在组织中的位置关系。Mclean 和Nakane 等认为,最佳的混合是:含0.01mol/L 的过碘酸盐、0.075mol/L 的赖氨酸、2%的多聚甲醛及0.037mol/L 的磷酸缓冲液。6、Karnovsky’s 液(pH7.3) 试剂:多聚甲醛 30g25%戊二醛 80ml0.1mol/L PB 至1000ml配制方法:先将多聚甲醛溶于0.1mol/L PB 中,再加入戊二醛,最后加0.1mol/L 的PB 至1000ml,混匀。该固定剂适于电镜免疫细胞化学,用该固定液在4℃短时固定,比在较低浓度的戊二醛中长时间固定能更好地保存组织的抗原性和细微结构。固定时最好先灌注固定,接着浸泡固定10~30min,用缓冲液漂洗后即可树酯包埋或经蔗糖溶液后用于恒冷切片。7、0.4% 对苯醌 (Parabenzoquinone)试剂:对苯醌 4.0g0.01mol/L PBS 1000ml配制方法:称取4.0g 对苯溶于1000ml 0.01mol/L 的PBS 即可。对苯醌对抗原具有较好的保护作用,但对超微结构的保存有一定影响,故常与醛类固定剂混合使用。一般要求临用前配制,且避免加热助溶,因加热或放置时间过长,固定液变为棕色至褐色,会使组织标本背景增加,影响观察。此外, 对苯醌有剧毒,使用时避免吸入或与皮肤接触。8、PFG 液(Parabenzoquinone-Formaldehyde-Glutaraldehyde fixative, PFG) 试剂:对苯醌 20g多聚甲醛 15g25%戊二醛 40ml0.1 mol/L 二甲酸钠缓冲液 至1000ml配制方法:先以500ml 左右的二甲酸钠缓冲液溶解对苯醌及多聚甲醛,然后加入戊二醛,最后加入二甲酸钠缓冲液至1000ml 充分混合。对苯醌与戊二醛及甲醛联合应用,即可阻止醛基对抗原的损害,又不影响超微结构的保存,故适于多种类抗原的免疫细胞化学,尤其是免疫电镜的研究。9、碳二亚酰胺-戊二醛(ECD-G)液试剂:0.05mol/LPB 500ml0.01mol/L PBS 500mlTris 约14g浓HCl 少许ECD 10g25%戊二醛 3.5ml配制方法:先以约500ml 的PB 与相同体积的PBS 混合,加入Tris(使其终浓度为1.4%)溶解,以浓HCl 调pH 至7.0,再将事先称取好的ECD 和戊二醛加入混合液,振摇后计时,用pH 计检测,约2~3min 时,pH 降至6.6,再以1N 的NaOH 在4min 内调pH 至7.0,此时,将该混合固定液加入盛有细胞(经PBS 漂洗过)的器皿中,在23℃固定 7min 后,以PBS 洗去固定液,即可进一步处理。ECD 即 乙 基 - 二 甲 基 氨 基 丙 基 碳 亚 胺 盐 酸 盐[1-ethyl-3(3-dimethyl-aminoprpyl)-carboi-imide hydrochloride],简称乙基-CDI, 常用于多肽类激素的固定,对酶等蛋白质的固定也有良好效果。ECD 单独应用时,边缘固定效应重,但与戊二醛、Tris 及PB 联合应用,效果明显改善,细胞质仍可渗透,利用细胞中抗原的定位,超微结构保存较好。目前认为是一种用于培养细胞电镜水平免疫细胞化学研究的很好的固定剂。10、四氧化锇(锇酸Osmic Acid, OsO4)配制:将洗净装有OsO4 的安瓿中加热后,迅速投入装有溶剂的棕色瓶中,使安瓿遇冷自破。也可用钻石刀在安瓿上划痕,洗净后再放入瓶中,盖好瓶塞, 用力撞击安瓿,待其破后加溶剂稀释。为保证充分溶解,应在用前几天配制。(1)2% OsO4 水溶解:取OsO41g 溶于重蒸水中。此液常作为储备液,于冰箱中密封保存。(2)1% OsO4-PB:试剂:A、2.26% NaH2PO4·2H2O 4.15mlB、2.52% 8.5mlC、5.4% 葡萄糖 5mlD、OsO4 0.5g配制方法:先分别配好A、B、C 三种液体,取A 液41.5ml与B 液8.5ml混合,将pH 调至7.3~7.4,取A-B 混合液45ml 再与5ml C 液混合即为0.12mol/LPBG。(3)1% OsO4/0.1mol/L 二甲胂酸钠缓冲液(pH7.2~7.4):试剂:2% OsO4 水溶液 10ml0.2 mol/L 二甲胂酸钠缓冲液(pH7.2~7.4) 10ml配制方法:取2%OsO4 储备液10ml 与等量0.2mol/L、pH7.2~7.4 的二甲胂酸钠缓冲液充分混合即可。OsO4 是电镜研究所必需的试剂,常用于后固定。尽管OsO4 主要为脂类固定剂,但也可与肽类及蛋白质起作用,形成肽-蛋白质或肽-脂交联。过氧化物酶的反应产物经OsO4 处理后,电子密度增高,适于电镜研究。但由于OsO4 的反应产物对光及电子有较明显的吸收能力,因此在免疫细胞化学染色前常需去除, 去锇在光镜水平常用 1%的高锰酸钾,在电镜水平则常用H2O2 来处理。以上介绍了目前免疫细胞化学中常用的一些固定液。关于固定液种类还很多,如70%~90%的酒精、丙酮、醋酸酒精(含0.1%~1%醋酸的70%~90%的酒精等),这些溶液都能促使蛋白质凝固。它们最初只是光学显微镜通用的固定液,但在免疫细胞化学上用其它方法不成功时,也可试用。总之,掌握一个原则, 免疫细胞化学中,含重金属的固定液禁用(但Zenker-Formalin 可进行短时的固定)。目前多数认为,对生物标本较好的固定措施是:用4℃的 Karnovsky’s 液灌注固定10~30min 后,接着在pH7.3、0.1mol/L 的二甲胂酸钠缓冲液中漂洗过液,这种短时冷固定处理,有助于超微结构和许多肽类抗原的保存。对其它较难保存的抗原可尝试PFG、PLP 及Zamboni’s 液等混合固定液。免疫细胞化学常用试剂中的10种固定液编辑于 2018-07-31 11:11试剂化学试剂赞同 244 条评论分享喜欢收藏申请
4%多聚甲醛 - 知乎
4%多聚甲醛 - 知乎切换模式写文章登录/注册4%多聚甲醛上海多沃Dowobio4%多聚甲醛固定液(4% Paraformaldehyde Fix Solution, 4% PFA Fix Solution)是一种广泛用于免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)、免疫荧光(Immunofluorescence, IF)、免疫细胞化学(Immunocytochemistry, IC)、流式分析(Fluorescence-activated cell sorting, FACS)等检测时组织、组织切片、细胞等生物样品固定的溶液。本产品配制在PBS溶液中,可直接用于组织或细胞的固定,无需稀释。若需使用低浓度多聚甲醛,可使用PBS按比例稀释。固定效果好、应用广,适用于各种常见细胞或组织的固定,对皮肤、肌肉、内脏等均有良好的固定效果,但主要作用于蛋白质,无法固定尿酸和糖类等。经反复测试,可以很好的适用于IHC、IF、IC和FACS等相关检测时样品的固定。保存说明:常温。使用说明:a. 对于细胞样品:去除培养后,按照每六孔板加入1ml固定液的比例,加入4%多聚甲醛固定液b. 对于细胞涂片、组织切片等其它细胞样品:加入固定液的量应以充分盖住样品为准c. 通常固定10-20min即可,后续需使用适当的洗涤液充分洗涤以除去残留的多聚甲醛 d. 对于组织块样品:浸泡在4%多聚甲醛固定液中,室温或4℃浸泡固定2-24h,建议不超过8h,除非组织块特别大,难以浸透。固定完成后,放入装有蒸馏水的离心管中清洗,每15-30min换一次水,共6-8次,建议在摇床上进行,或流水冲洗1-2h,随后梯度脱水,进行包埋,如果暂时不包埋,可放入70-75%的酒精中保存。注意事项:1. 本产品放置过久其中的醛基可能会被氧化为酸,使溶液pH降低,从而影响染色。2. 不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。3. 多聚甲醛虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过24小时。4. 对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。5. 仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 Dowobio 发布于 2024-01-25 09:11・IP 属地重庆・来源官方网站聚甲醛细胞赞同添加评论分享喜欢收藏申请
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4%多聚甲醛/通用型组织固定液
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规格:500ml
品牌:Biosharp
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通用型组织固定液 产品货号 产品名称规格 BL539A 4%多聚甲醛/通用型组织固定液 500ml产品简介:组织细胞中的大多数肽类激素、蛋白物质为水溶性,在进行病理研究之前必需固定。多聚甲醛能很好地保存组织的抗原性和细微结构,与福尔马林相比更适用于小动物组织标本的固定,也非常适合组织和细胞的光镜病理或免疫化学研究。本产品为 4%多聚甲醛的缓冲溶液,pH 为中性。用于组织和细胞标本的固定。 操作说明:将组织标本放入本产品中,固定 24h 左右即可。细胞爬片固定 15min 即可。 保存条件:常温12个月 ,拆封后建议4℃保存以保证更好的保存效果。
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500ml
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Biosharp
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常用的固定液有哪些?都适用于哪些组织? - 知乎
常用的固定液有哪些?都适用于哪些组织? - 知乎首发于病理技术指南切换模式写文章登录/注册常用的固定液有哪些?都适用于哪些组织?合森医学固定液用于固定组织的化学物质称为固定液或固定剂,一般由单一化学物质组成者称为固定剂或单纯固定液,由多种化学物质混合组成者称为混合固定液或复合固定液。最常用的组织固定剂是甲醛,乙醇溶液也可作为固定剂。此外,还有一些混合固定液。各种固定液有其各自的优缺点,可根据实验需要进行选择。常用的单纯固定液和混合固定液介绍如下。(一) 单纯固定液1.甲醛(formaldehyde) 是一种无色刺激性气体,市售甲醛水溶液的实际浓度为 36%~38%,我们用作病理样本固定的浓度为 3.6%~3.8%甲醛溶液(9份水加1份浓甲醛),也称为10%福尔马林液(formalin),不仅价格便宜,而目组织穿透力强,固定均匀,组织收缩较小,可长期保存样本,适合多种特殊染色。甲醛对脂类和类脂、神经及髓鞘均有良好的固定效果,也可固定高尔基体、线粒体和糖类,但甲醛对血红素有破坏作用,故经甲醛固定的组织均失去原有的颜色。甲醛是一种交联性组织固定剂。主要通过使蛋白质分子发生交联而产生固定作用,其虽然不能使白蛋白和核蛋白沉淀,但其提供亚甲基(-CH2),可与蛋白质中许多氨基酸(如赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、色氨酸等)侧链发生反应。此液久存会自行分解,形成白色沉淀副醛(三聚甲醛或多聚甲醛),可过滤后使用滤液。因这种溶液中有甲酸产生,使溶液呈酸性,影响细胞核的染色,因此储存时间长的甲醛应放入少量碳酸镁或碳酸钠,或用大理石中和。2.苦味酸 为黄色结晶体,是一种强酸,易燃易爆。一般配成饱和溶液储存。常用其饱和溶液作为固定剂。苦味酸能沉淀一切蛋白质,穿透慢,组织收缩明显,但组织无明显硬化,对脂肪和类脂无固定作用,用乙醇溶解可固定糖类。固定后的组织经乙醇脱水即可,也可用 50% 或 70% 的乙醇浸洗。苦味酸可软化火棉胶,因此用苦味酸或其混合固定液固定的组织不宜用火棉胶包埋。苦味酸可使皮肤软化,因此用苦味酸或其混合固定液固定皮肤组织时,易制作完整的切片。用含苦味酸的固定液固定组织时,时间不宜超过 24h,固定后的组织应尽快放入 70%乙醇,并在乙醇中滴加少量饱和碳酸锂水溶液或浓氨水,有助于除去苦味酸固定产生的黄色。3.锇酸 即四氧化锇,为淡黄色结晶,是强氧化剂,不能与乙醇和甲醛等混合。常用其 1%~2%的水溶液作为固定液。锇酸主要作为脂类(脂肪和类脂)固定剂,也可与肽类和蛋白质作用形成肽-蛋白质或肽-脂交联,使蛋白质固定均匀,不产生沉淀,特别适用于线粒体和内质网的固定,是电镜研究的必需固定剂,常用于后固定。锇酸为剧毒品,使用时应注意防护,注意保护眼睛、呼吸器官和皮肤。4.丙酮 为易挥发易燃的无色液体,可与水、醇、三氯甲烷和醚等混合。可使蛋白质沉淀,渗透力强,对核的固定差。广泛用于酶和组织化学方法中各种酶的固定(如磷酸酶、脂酶和氧化酶等)。作用基本与乙醇相同,但对糖原无固定作用。5.冰乙酸 纯乙酸为带有刺激性气味的无色液体,低于 15℃时常结成冰状,故称为冰乙酸。冰乙酸可以各种比例与水或乙醇混合,常用其0.3%~5%的溶液作为固定液。冰乙酸不能沉淀白蛋白和球蛋白,但能沉淀核蛋白,所以对染色质固定很好。冰乙酸的穿透速度很快,组织不会硬化,且可防止经乙醇处理时引起的高度收缩及硬化。缺点是能使组织膨胀,尤其对于胶原纤维和纤维蛋白,一般很少单独使用,若单独使用时,只能固定极短时间。高浓度的乙酸会破坏高尔基体和线粒体,故在高尔基体和线粒体染色的固定中不用冰乙酸。6.乙醇 俗称酒精,为无色液体,可与水无限相溶,具有硬化、固定、脱水等作用。但组织渗透力较弱,固定速度较慢,易使组织变脆。用于固定的浓度为 80%~95%。其能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白,但核蛋白经沉淀后,能溶于水,不利于染色体的固定,导致核染色不良。此外,高浓度乙醇固定的组织硬化显著,若留置过久,组织收缩明显且质脆,不但影响制片,组织形态也不好。用 100% 乙醇固定时,其穿透速度快,主要用于糖原的固定,如肝组织、阿米巴原虫和尤因肉瘤的糖原染色。用 70% 乙醇可较长时间保存组织。(二) 混合固定液配制混合固定液时,一般要求氧化剂不要与还原剂混合,以免引起化学反应,使其失去固定作用。1.10% 中性缓冲福尔马林 是以pH 值7.2~7.4的磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution,PBS)为溶剂配制的甲醛水溶液。10%中性缓冲福尔马林对组织抗原性的保存优于一般的 10%福尔马林,是人体和实验动物组织最常用的固定液。同时,10%中性缓冲福尔马林可显著增加对铁离子的检出速度,并且可以避免福尔马林色素的形成。配制方法:甲醛100ml,蒸馏水 90ml,单水磷酸二氢钠4g,磷酸氢二钠6.5g,用 1mol/L NaOH 调整 pH 值至 7.0~7.22.乙醇-甲醛液(A-F液) 有固定兼脱水作用,样本固定后可直接用 95% 乙醇脱水。配制方法:100% 乙醇或 95% 乙醇 90ml,36%~38%甲醛溶液 10ml。3.Bouin液 渗透力强,对组织固定均匀,收缩很少,不会使组织变硬变脆,是一种常规用于外科活检样本固定的良好固定液,特别适用于睾丸、骨髓活检组织的固定,但对免疫组化和分子病理检测影响较大。小块组织只需固定数小时,较大脏器固定 12~24h 为宜。有一定毒性,应避免吸入或与皮肤接触。配制方法:饱和苦味酸水溶液:甲醛溶液:冰乙酸=15:5:1。4.Carnoy液 有防止乙醇硬化和收缩的作用,渗透力强,能很好地固定细胞质和染色质,显示DNA 和RNA效果好,特别适合固定外膜致密的组织,在固定组织的同时,能溶解大部分脂肪。也常用于糖原和尼氏体的固定,糖原贮积病的样本可用此固定液固定。Carnoy 液不能保存脂类,不适用于脂肪染色。该液固定速度快,3mm 厚的组织块 1h 内即可固定,大块组织最好不超过 4h。配制方法:冰乙酸 10ml,三氯甲烷 30ml,100% 乙醇 60ml。5.Zenker液 为形态学研究常用的固定液,此液中的铬酸、冰乙酸和氯化汞均有组织固定作用。经Zenker液固定的样本,细胞核和细胞质染色颇为清晰,用于一些肿瘤样本(如横纹肌肉瘤和未成熟型畸胎瘤)的固定效果好,对免疫球蛋白染色最好。对于病毒包涵体(如 Negri小体)的固定效果也较好,但对于含血量较多的样本,如充血的脾脏和肺梗死等样本则不合适。一般固定 12~24h 即可,加热可加快固定作用。但配制该液的试剂较昂贵,且需处理汞。配制方法:储存液由重铬酸钾 2.5g,氯化汞5g,蒸馏水 100ml组成。配制该液时,可将重铬酸钾和氯化汞一起加入蒸馏水中,加温 40~50℃溶解,冷却过滤后存于棕色瓶内。临用时,取此液 95ml,加人冰乙酸 5ml 即可。此固定液不能用金属容器盛放,组织固定后,也不要用金属镊夹取。6.4% 多聚甲醛 该固定液适用于光镜免疫组织化学方法。动物先用此液进行灌注固定,取材后,再用该液浸泡固定 2~24h。该液也可用于组织样本较长时间的保存。配制方法:40g多聚甲醛,溶于1000ml0.1mol/L的PBS,加热60℃,边搅拌边加温至透明即可(一般滴加少量 lmol/L 的 NaOH)。7. Verhoeff 液 常用于固定眼球,固定 48h 后,即可脱水。配制方法:36%~38% 甲醛溶液 10ml,95% 乙醇 48ml,蒸馏水 36ml,苦味酸1g。合森医学专业承接包埋HE、IHC、 IF, Tunel、 WB、FISH、特殊染色、整体课题动物、细胞实验、组织芯片等各种实验服务。合森医学,忠您所托!编辑于 2023-04-27 14:26・IP 属地安徽病理学组织学赞同 15添加评论分享喜欢收藏申请转载文章被以下专栏收录病理技-1.4 %����
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