比特派钱包app下载网站|多聚甲醛固定液

作者: 比特派钱包app下载网站
2024-03-07 23:48:21

4%多聚甲醛固定液(P0099-100ml)

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Microtubule Dynamics

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Jak/Stat:IL-6 Signaling

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B Cell Receptor Signaling

T Cell Receptor Signaling

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MAPK/Erk in Growth & Differentiation

MAPK/Erk in GPCR Signaling

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p38 MAPK Signaling

PI3K/Akt Signaling

mTOR Signaling

MAP Kinase Signaling

Protein Tyrosine Kinase Signaling

神经科学

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Neuronal Signaling

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PKC Signaling

Phospholipid Signaling

Protein Posttranslational Modification

干细胞、发育与分化

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Stem Cell & Lineage Markers

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Angiogenesis

蛋白翻译、折叠和降解

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Translational Regulation

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4%多聚甲醛固定液(4% Paraformaldehyde Fix Solution, 4% PFA Fix Solution)是一种广泛用于免疫组化

(Immunohistochemistry, IHC)、免疫荧光(Immunofluorescence, IF)、免疫细胞化学(Immunocytochemistry, IC)、流式分析(Fluorescence-activated cell sorting, FACS)等检测时组织、组织切片、细胞等生物样品固定的溶液。本产品配制在PBS溶液中,可直接用于组织或细胞的固定,无需稀释。若需使用低浓度多聚甲醛,可使用PBS按比例稀释。

组织学上,4%的多聚甲醛穿透力强,固定均匀,能使组织硬化,有利于切片。该固定剂造成的组织收缩少,损伤小,较为温和,能很好的保存固有物质,保持组织的抗原性和细微结构。此外,多聚甲醛可用于固定并保存脂肪及脂类物质。

本产品固定效果好、应用广,适用于各种常见细胞或组织的固定,对皮肤、肌肉、内脏等均有良好的固定效果,但主要作用于蛋白质,无法固定尿酸和糖类等。

固定液可使细胞或组织的蛋白质凝固,终止内源性或外源性酶反应,防止组织自溶或异溶,以保持原有结构和形态。对免疫组化而言更有原位保存抗原的作用,避免抗原失活或弥散。固定液种类很多,常见的有多聚甲醛、甲醛、戊二醛、乙醇、丙酮等。其固定原理不同,各有优缺点。目前在科学研究中多聚甲醛应用最广,通过形成分子间的交联从而使细胞或组织的三维结构得以被固定。多聚甲醛是甲醛的聚合物,性质比甲醛稳定,且对抗原的破坏能力弱于甲醛,因此,科学研究中常用多聚甲醛作为固定剂。

本产品经反复测试,可以很好的适用于IHC、IF、IC和FACS等相关检测时样品的固定。

按照每个样品固定时需要1毫升固定液计算,一个包装的本产品可以固定100个或500个样品。

包装清单:

产品编号

产品名称

包装

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4%多聚甲醛固定液

100ml

P0099-500ml

4%多聚甲醛固定液

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1份

保存条件:

-20℃保存,一年有效。4℃保存,一个月有效。

注意事项:

本产品放置过久其中的醛基可能会被氧化为酸,使溶液pH降低,从而影响染色。

不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。

多聚甲醛虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过24小时。

多聚甲醛可长期存在于固定过的细胞或组织样品中,固定完成后用适当的洗涤液或水冲洗数小时仍会有残留,因此后续实验结果如果受醛基影响,须尽量洗去残留的多聚甲醛。

醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,4%多聚甲醛固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。

本产品对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:

1. 对于细胞样品,去除培养液后,按照每六孔板一个孔加入1毫升固定液的比例,加入4%多聚甲醛固定液。对于细胞涂片等其它细胞样品,加入固定液的量以充分盖住样品为准。通常室温固定10-20分钟即可,但固定较长时间,例如1-2小时也是可以的。后续需使用适当的洗涤液充分洗涤以去除残留的多聚甲醛。

2. 对组织切片,加入4%多聚甲醛固定液量以充分覆盖切片为准,或使用染色架进行固定。通常室温固定10-20分钟即可完成固定,但切片较厚时可以固定较长时间,例如1-2小时。后续需使用适当的洗涤液充分洗涤以去除残留的多聚甲醛。

3. 对于组织块样品,浸泡入4%多聚甲醛固定液中,室温或4℃浸泡固定2到24小时。建议不超过8小时,除非组织块特别大,难以渗透。固定完成后,放入装有蒸馏水的离心管中清洗,每15-30分钟换一次水,共6-8次,建议在摇床进行,或用流水冲洗1-2小时。随后梯度脱水,进行包埋。如果暂时不包埋可放入70-75%的酒精中保存。

4. 详细的免疫染色操作可以参考我们的相关网页:http://www.beyotime.com/support/immunol-staining.htm。

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P0090

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100ml

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P0097-500ml

免疫染色强力通透液

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P0102

免疫染色封闭液

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免疫细胞化学常用试剂中的10种固定液 - 知乎

免疫细胞化学常用试剂中的10种固定液 - 知乎切换模式写文章登录/注册免疫细胞化学常用试剂中的10种固定液冉盛网大多数神经激素、肽类物质为水溶性,在用于免疫细胞化学研究之前,常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同,因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此,在进行免疫细胞化学研究之前,很有必要了解所要研究的物质(蛋白质或肽类)的化学性质,并根据需要来选择适宜的固定剂(或固定方法)以及改进固定条件。目前,免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂,其中以甲醛类和戊二醛最为常用。今天给大家简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂。1、4%多聚甲醛-0.1mol/L 磷酸缓冲液(pH7.3) 试剂:多聚甲醛 40g0.1mol/L 磷酸缓冲液 至1000ml配制方法:称取40g 多聚甲醛,置于三角烧瓶中,加入500~800ml 0.1mol/L 磷酸缓冲液(Phosphate Buffer 以下简称PB),加热至60℃左右,持续搅拌(或磁力搅拌)使粉末完全溶解,通常需滴加少许 1n NaOH 才能使溶液清亮,最后补足0.1mol/L 的PB于1000ml,充分混匀。该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究,最好是动物经灌注固定取材后,继续浸泡固定2~24h。另外,该固定剂较为温和,适于组织标本的较长期保存。2、4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠试剂:A 液:多聚甲醛 40g 蒸馏水 400mlB 液:Na2HPO4·2H2O 16.88g蒸馏水 300mlC 液:NaOH 3.86g蒸馏水 200m配制方法:A 液最好在500ml 的三角烧瓶中配制(方法同前),至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意,在溶解多聚甲醛时,要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B 液和C 液配制好后,将B 液倒入C 液中,混合后再加入A 液,以1n NaOH 或1N HCl 将pH 调至7.2~7.4,最后,补充蒸馏水至1000ml 充分混合,4℃冰箱保存备用。该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究,用于免疫电镜时,最好加入少量新鲜配制的戊二醛,使其终浓度为0.5%~1%。该固定剂较温和,适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中,4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。3、Bouin’s 液及改良Bouin’s 液试剂:饱和苦味酸40%甲醛 250ml冰醋酸 50ml配制方法:先将饱苦味酸过滤,加入甲醛(有沉淀者禁用),最后加入冰醋酸,混合后存于4℃冰箱中备用。冰醋酸最好在临用前加入。改良 Bouin’s 液即不加冰醋酸。该固定液为组织学、病理学常用固定剂这一,对组织的穿透力较强,固定较好,结构完整。但因偏酸(pH 为3~3.5),对抗原有一定损害,且组织收缩较明显,故不适于组织标本的长期保存。此外,操作时,应避免吸入或与皮肤接触。4、Zamboni’s(Stefanini’s)液试剂:多聚甲醛 20g饱和苦味酸 150mlKarasson-Schwlt’s PB 至1000ml配制方法:称取多聚甲醛20g,加入饱和苦味酸150ml,加热至60℃左右, 持续搅拌使充分溶解、过滤、冷却后,加Karasson-Schwlt’s PB 至1000ml 充分混合(Karasson –Schwlt’s 磷酸缓冲液的配制配制方法见后)。该固定液适于电镜免疫细胞化学,对超微结构的保存较纯甲醛为优,也适于光镜免疫细胞化学研究,为实验室常用固定剂之一。我们在应用中,常采用2.5% 的多聚甲醛和30%的饱和苦味酸,以增加其对组织的穿透力和固定效果,保存更多的组织抗原。固定时间为6~18h。5 、PLP 液 PLP 液 即 过 碘 酸 盐- 赖 氨 酸- 多 聚 甲 醛 固 定 液(Periodate-Lysine-paraform-alde-hyde fixative)试剂:过碘酸钠赖氨酸盐酸盐(或盐酸赖氨酸):多聚甲醛蒸馏水配制方法:(1)贮存液A(0.1mol/L 赖氨酸-0.5mol/l Na3PO4,pH7.4):称取赖氨酸盐酸盐1.827g 溶于50ml 蒸馏水中,得0.2mol/L 的赖氨酸盐酸盐溶液,然后加入Na2HPO4 至0.1mol/L,将pH 调至7.4,补足0.1mol/L 的PB 至100ml,使赖氨酸浓度也为0.1mol/L,4℃冰箱保存,最好两周内使用。此溶液的渗透浓度为300mOs mmol/L/kg。(2)贮存液B(8%多聚甲醛溶液):称8g 多聚甲醛加入100ml 蒸馏水中,配成8%多聚甲醛液(方法见前)。过滤后4℃冰箱保存。(3)临用前,以3 份A 液与1 份B 液混合,再加入结晶过碘酸钠(NaIO4),使NaIO4 终浓度为2%。由于AB 两液混合,pH 从约7.5 降至6.2,故固定时不需再调pH 值。固定时间为6~18h。该固定剂较适于富含糖类的组织,对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。其机制是借助于过碘酸氧化组织中的糖类形成醛基,通过赖氨酸的双价氨基与醛基结合,从而与糖形成交联。由于组织抗原绝大多数都是由蛋白质和糖两部分构成,抗原决定簇位于蛋白部分,故该固定剂有选择性地使糖类固定,这样既稳定了抗原,又不影响其在组织中的位置关系。Mclean 和Nakane 等认为,最佳的混合是:含0.01mol/L 的过碘酸盐、0.075mol/L 的赖氨酸、2%的多聚甲醛及0.037mol/L 的磷酸缓冲液。6、Karnovsky’s 液(pH7.3) 试剂:多聚甲醛 30g25%戊二醛 80ml0.1mol/L PB 至1000ml配制方法:先将多聚甲醛溶于0.1mol/L PB 中,再加入戊二醛,最后加0.1mol/L 的PB 至1000ml,混匀。该固定剂适于电镜免疫细胞化学,用该固定液在4℃短时固定,比在较低浓度的戊二醛中长时间固定能更好地保存组织的抗原性和细微结构。固定时最好先灌注固定,接着浸泡固定10~30min,用缓冲液漂洗后即可树酯包埋或经蔗糖溶液后用于恒冷切片。7、0.4% 对苯醌 (Parabenzoquinone)试剂:对苯醌 4.0g0.01mol/L PBS 1000ml配制方法:称取4.0g 对苯溶于1000ml 0.01mol/L 的PBS 即可。对苯醌对抗原具有较好的保护作用,但对超微结构的保存有一定影响,故常与醛类固定剂混合使用。一般要求临用前配制,且避免加热助溶,因加热或放置时间过长,固定液变为棕色至褐色,会使组织标本背景增加,影响观察。此外, 对苯醌有剧毒,使用时避免吸入或与皮肤接触。8、PFG 液(Parabenzoquinone-Formaldehyde-Glutaraldehyde fixative, PFG) 试剂:对苯醌 20g多聚甲醛 15g25%戊二醛 40ml0.1 mol/L 二甲酸钠缓冲液 至1000ml配制方法:先以500ml 左右的二甲酸钠缓冲液溶解对苯醌及多聚甲醛,然后加入戊二醛,最后加入二甲酸钠缓冲液至1000ml 充分混合。对苯醌与戊二醛及甲醛联合应用,即可阻止醛基对抗原的损害,又不影响超微结构的保存,故适于多种类抗原的免疫细胞化学,尤其是免疫电镜的研究。9、碳二亚酰胺-戊二醛(ECD-G)液试剂:0.05mol/LPB 500ml0.01mol/L PBS 500mlTris 约14g浓HCl 少许ECD 10g25%戊二醛 3.5ml配制方法:先以约500ml 的PB 与相同体积的PBS 混合,加入Tris(使其终浓度为1.4%)溶解,以浓HCl 调pH 至7.0,再将事先称取好的ECD 和戊二醛加入混合液,振摇后计时,用pH 计检测,约2~3min 时,pH 降至6.6,再以1N 的NaOH 在4min 内调pH 至7.0,此时,将该混合固定液加入盛有细胞(经PBS 漂洗过)的器皿中,在23℃固定 7min 后,以PBS 洗去固定液,即可进一步处理。ECD 即 乙 基 - 二 甲 基 氨 基 丙 基 碳 亚 胺 盐 酸 盐[1-ethyl-3(3-dimethyl-aminoprpyl)-carboi-imide hydrochloride],简称乙基-CDI, 常用于多肽类激素的固定,对酶等蛋白质的固定也有良好效果。ECD 单独应用时,边缘固定效应重,但与戊二醛、Tris 及PB 联合应用,效果明显改善,细胞质仍可渗透,利用细胞中抗原的定位,超微结构保存较好。目前认为是一种用于培养细胞电镜水平免疫细胞化学研究的很好的固定剂。10、四氧化锇(锇酸Osmic Acid, OsO4)配制:将洗净装有OsO4 的安瓿中加热后,迅速投入装有溶剂的棕色瓶中,使安瓿遇冷自破。也可用钻石刀在安瓿上划痕,洗净后再放入瓶中,盖好瓶塞, 用力撞击安瓿,待其破后加溶剂稀释。为保证充分溶解,应在用前几天配制。(1)2% OsO4 水溶解:取OsO41g 溶于重蒸水中。此液常作为储备液,于冰箱中密封保存。(2)1% OsO4-PB:试剂:A、2.26% NaH2PO4·2H2O 4.15mlB、2.52% 8.5mlC、5.4% 葡萄糖 5mlD、OsO4 0.5g配制方法:先分别配好A、B、C 三种液体,取A 液41.5ml与B 液8.5ml混合,将pH 调至7.3~7.4,取A-B 混合液45ml 再与5ml C 液混合即为0.12mol/LPBG。(3)1% OsO4/0.1mol/L 二甲胂酸钠缓冲液(pH7.2~7.4):试剂:2% OsO4 水溶液 10ml0.2 mol/L 二甲胂酸钠缓冲液(pH7.2~7.4) 10ml配制方法:取2%OsO4 储备液10ml 与等量0.2mol/L、pH7.2~7.4 的二甲胂酸钠缓冲液充分混合即可。OsO4 是电镜研究所必需的试剂,常用于后固定。尽管OsO4 主要为脂类固定剂,但也可与肽类及蛋白质起作用,形成肽-蛋白质或肽-脂交联。过氧化物酶的反应产物经OsO4 处理后,电子密度增高,适于电镜研究。但由于OsO4 的反应产物对光及电子有较明显的吸收能力,因此在免疫细胞化学染色前常需去除, 去锇在光镜水平常用 1%的高锰酸钾,在电镜水平则常用H2O2 来处理。以上介绍了目前免疫细胞化学中常用的一些固定液。关于固定液种类还很多,如70%~90%的酒精、丙酮、醋酸酒精(含0.1%~1%醋酸的70%~90%的酒精等),这些溶液都能促使蛋白质凝固。它们最初只是光学显微镜通用的固定液,但在免疫细胞化学上用其它方法不成功时,也可试用。总之,掌握一个原则, 免疫细胞化学中,含重金属的固定液禁用(但Zenker-Formalin 可进行短时的固定)。目前多数认为,对生物标本较好的固定措施是:用4℃的 Karnovsky’s 液灌注固定10~30min 后,接着在pH7.3、0.1mol/L 的二甲胂酸钠缓冲液中漂洗过液,这种短时冷固定处理,有助于超微结构和许多肽类抗原的保存。对其它较难保存的抗原可尝试PFG、PLP 及Zamboni’s 液等混合固定液。免疫细胞化学常用试剂中的10种固定液编辑于 2018-07-31 11:11试剂化学试剂​赞同 24​​4 条评论​分享​喜欢​收藏​申请

4%多聚甲醛 - 知乎

4%多聚甲醛 - 知乎切换模式写文章登录/注册4%多聚甲醛上海多沃Dowobio4%多聚甲醛固定液(4% Paraformaldehyde Fix Solution, 4% PFA Fix Solution)是一种广泛用于免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)、免疫荧光(Immunofluorescence, IF)、免疫细胞化学(Immunocytochemistry, IC)、流式分析(Fluorescence-activated cell sorting, FACS)等检测时组织、组织切片、细胞等生物样品固定的溶液。本产品配制在PBS溶液中,可直接用于组织或细胞的固定,无需稀释。若需使用低浓度多聚甲醛,可使用PBS按比例稀释。固定效果好、应用广,适用于各种常见细胞或组织的固定,对皮肤、肌肉、内脏等均有良好的固定效果,但主要作用于蛋白质,无法固定尿酸和糖类等。经反复测试,可以很好的适用于IHC、IF、IC和FACS等相关检测时样品的固定。保存说明:常温。使用说明:a. 对于细胞样品:去除培养后,按照每六孔板加入1ml固定液的比例,加入4%多聚甲醛固定液b. 对于细胞涂片、组织切片等其它细胞样品:加入固定液的量应以充分盖住样品为准c. 通常固定10-20min即可,后续需使用适当的洗涤液充分洗涤以除去残留的多聚甲醛 d. 对于组织块样品:浸泡在4%多聚甲醛固定液中,室温或4℃浸泡固定2-24h,建议不超过8h,除非组织块特别大,难以浸透。固定完成后,放入装有蒸馏水的离心管中清洗,每15-30min换一次水,共6-8次,建议在摇床上进行,或流水冲洗1-2h,随后梯度脱水,进行包埋,如果暂时不包埋,可放入70-75%的酒精中保存。注意事项:1. 本产品放置过久其中的醛基可能会被氧化为酸,使溶液pH降低,从而影响染色。2. 不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。3. 多聚甲醛虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过24小时。4. 对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。5. 仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 Dowobio 发布于 2024-01-25 09:11・IP 属地重庆・来源官方网站聚甲醛细胞​赞同​​添加评论​分享​喜欢​收藏​申请

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通用型组织固定液  产品货号  产品名称规格 BL539A   4%多聚甲醛/通用型组织固定液    500ml产品简介:组织细胞中的大多数肽类激素、蛋白物质为水溶性,在进行病理研究之前必需固定。多聚甲醛能很好地保存组织的抗原性和细微结构,与福尔马林相比更适用于小动物组织标本的固定,也非常适合组织和细胞的光镜病理或免疫化学研究。本产品为 4%多聚甲醛的缓冲溶液,pH 为中性。用于组织和细胞标本的固定。 操作说明:将组织标本放入本产品中,固定 24h 左右即可。细胞爬片固定 15min 即可。 保存条件:常温12个月 ,拆封后建议4℃保存以保证更好的保存效果。

货号

BL539A

规格

500ml

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Biosharp

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常用的固定液有哪些?都适用于哪些组织? - 知乎

常用的固定液有哪些?都适用于哪些组织? - 知乎首发于病理技术指南切换模式写文章登录/注册常用的固定液有哪些?都适用于哪些组织?合森医学​固定液用于固定组织的化学物质称为固定液或固定剂,一般由单一化学物质组成者称为固定剂或单纯固定液,由多种化学物质混合组成者称为混合固定液或复合固定液。最常用的组织固定剂是甲醛,乙醇溶液也可作为固定剂。此外,还有一些混合固定液。各种固定液有其各自的优缺点,可根据实验需要进行选择。常用的单纯固定液和混合固定液介绍如下。(一) 单纯固定液1.甲醛(formaldehyde) 是一种无色刺激性气体,市售甲醛水溶液的实际浓度为 36%~38%,我们用作病理样本固定的浓度为 3.6%~3.8%甲醛溶液(9份水加1份浓甲醛),也称为10%福尔马林液(formalin),不仅价格便宜,而目组织穿透力强,固定均匀,组织收缩较小,可长期保存样本,适合多种特殊染色。甲醛对脂类和类脂、神经及髓鞘均有良好的固定效果,也可固定高尔基体、线粒体和糖类,但甲醛对血红素有破坏作用,故经甲醛固定的组织均失去原有的颜色。甲醛是一种交联性组织固定剂。主要通过使蛋白质分子发生交联而产生固定作用,其虽然不能使白蛋白和核蛋白沉淀,但其提供亚甲基(-CH2),可与蛋白质中许多氨基酸(如赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、色氨酸等)侧链发生反应。此液久存会自行分解,形成白色沉淀副醛(三聚甲醛或多聚甲醛),可过滤后使用滤液。因这种溶液中有甲酸产生,使溶液呈酸性,影响细胞核的染色,因此储存时间长的甲醛应放入少量碳酸镁或碳酸钠,或用大理石中和。2.苦味酸 为黄色结晶体,是一种强酸,易燃易爆。一般配成饱和溶液储存。常用其饱和溶液作为固定剂。苦味酸能沉淀一切蛋白质,穿透慢,组织收缩明显,但组织无明显硬化,对脂肪和类脂无固定作用,用乙醇溶解可固定糖类。固定后的组织经乙醇脱水即可,也可用 50% 或 70% 的乙醇浸洗。苦味酸可软化火棉胶,因此用苦味酸或其混合固定液固定的组织不宜用火棉胶包埋。苦味酸可使皮肤软化,因此用苦味酸或其混合固定液固定皮肤组织时,易制作完整的切片。用含苦味酸的固定液固定组织时,时间不宜超过 24h,固定后的组织应尽快放入 70%乙醇,并在乙醇中滴加少量饱和碳酸锂水溶液或浓氨水,有助于除去苦味酸固定产生的黄色。3.锇酸 即四氧化锇,为淡黄色结晶,是强氧化剂,不能与乙醇和甲醛等混合。常用其 1%~2%的水溶液作为固定液。锇酸主要作为脂类(脂肪和类脂)固定剂,也可与肽类和蛋白质作用形成肽-蛋白质或肽-脂交联,使蛋白质固定均匀,不产生沉淀,特别适用于线粒体和内质网的固定,是电镜研究的必需固定剂,常用于后固定。锇酸为剧毒品,使用时应注意防护,注意保护眼睛、呼吸器官和皮肤。4.丙酮 为易挥发易燃的无色液体,可与水、醇、三氯甲烷和醚等混合。可使蛋白质沉淀,渗透力强,对核的固定差。广泛用于酶和组织化学方法中各种酶的固定(如磷酸酶、脂酶和氧化酶等)。作用基本与乙醇相同,但对糖原无固定作用。5.冰乙酸 纯乙酸为带有刺激性气味的无色液体,低于 15℃时常结成冰状,故称为冰乙酸。冰乙酸可以各种比例与水或乙醇混合,常用其0.3%~5%的溶液作为固定液。冰乙酸不能沉淀白蛋白和球蛋白,但能沉淀核蛋白,所以对染色质固定很好。冰乙酸的穿透速度很快,组织不会硬化,且可防止经乙醇处理时引起的高度收缩及硬化。缺点是能使组织膨胀,尤其对于胶原纤维和纤维蛋白,一般很少单独使用,若单独使用时,只能固定极短时间。高浓度的乙酸会破坏高尔基体和线粒体,故在高尔基体和线粒体染色的固定中不用冰乙酸。6.乙醇 俗称酒精,为无色液体,可与水无限相溶,具有硬化、固定、脱水等作用。但组织渗透力较弱,固定速度较慢,易使组织变脆。用于固定的浓度为 80%~95%。其能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白,但核蛋白经沉淀后,能溶于水,不利于染色体的固定,导致核染色不良。此外,高浓度乙醇固定的组织硬化显著,若留置过久,组织收缩明显且质脆,不但影响制片,组织形态也不好。用 100% 乙醇固定时,其穿透速度快,主要用于糖原的固定,如肝组织、阿米巴原虫和尤因肉瘤的糖原染色。用 70% 乙醇可较长时间保存组织。(二) 混合固定液配制混合固定液时,一般要求氧化剂不要与还原剂混合,以免引起化学反应,使其失去固定作用。1.10% 中性缓冲福尔马林 是以pH 值7.2~7.4的磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution,PBS)为溶剂配制的甲醛水溶液。10%中性缓冲福尔马林对组织抗原性的保存优于一般的 10%福尔马林,是人体和实验动物组织最常用的固定液。同时,10%中性缓冲福尔马林可显著增加对铁离子的检出速度,并且可以避免福尔马林色素的形成。配制方法:甲醛100ml,蒸馏水 90ml,单水磷酸二氢钠4g,磷酸氢二钠6.5g,用 1mol/L NaOH 调整 pH 值至 7.0~7.22.乙醇-甲醛液(A-F液) 有固定兼脱水作用,样本固定后可直接用 95% 乙醇脱水。配制方法:100% 乙醇或 95% 乙醇 90ml,36%~38%甲醛溶液 10ml。3.Bouin液 渗透力强,对组织固定均匀,收缩很少,不会使组织变硬变脆,是一种常规用于外科活检样本固定的良好固定液,特别适用于睾丸、骨髓活检组织的固定,但对免疫组化和分子病理检测影响较大。小块组织只需固定数小时,较大脏器固定 12~24h 为宜。有一定毒性,应避免吸入或与皮肤接触。配制方法:饱和苦味酸水溶液:甲醛溶液:冰乙酸=15:5:1。4.Carnoy液 有防止乙醇硬化和收缩的作用,渗透力强,能很好地固定细胞质和染色质,显示DNA 和RNA效果好,特别适合固定外膜致密的组织,在固定组织的同时,能溶解大部分脂肪。也常用于糖原和尼氏体的固定,糖原贮积病的样本可用此固定液固定。Carnoy 液不能保存脂类,不适用于脂肪染色。该液固定速度快,3mm 厚的组织块 1h 内即可固定,大块组织最好不超过 4h。配制方法:冰乙酸 10ml,三氯甲烷 30ml,100% 乙醇 60ml。5.Zenker液 为形态学研究常用的固定液,此液中的铬酸、冰乙酸和氯化汞均有组织固定作用。经Zenker液固定的样本,细胞核和细胞质染色颇为清晰,用于一些肿瘤样本(如横纹肌肉瘤和未成熟型畸胎瘤)的固定效果好,对免疫球蛋白染色最好。对于病毒包涵体(如 Negri小体)的固定效果也较好,但对于含血量较多的样本,如充血的脾脏和肺梗死等样本则不合适。一般固定 12~24h 即可,加热可加快固定作用。但配制该液的试剂较昂贵,且需处理汞。配制方法:储存液由重铬酸钾 2.5g,氯化汞5g,蒸馏水 100ml组成。配制该液时,可将重铬酸钾和氯化汞一起加入蒸馏水中,加温 40~50℃溶解,冷却过滤后存于棕色瓶内。临用时,取此液 95ml,加人冰乙酸 5ml 即可。此固定液不能用金属容器盛放,组织固定后,也不要用金属镊夹取。6.4% 多聚甲醛 该固定液适用于光镜免疫组织化学方法。动物先用此液进行灌注固定,取材后,再用该液浸泡固定 2~24h。该液也可用于组织样本较长时间的保存。配制方法:40g多聚甲醛,溶于1000ml0.1mol/L的PBS,加热60℃,边搅拌边加温至透明即可(一般滴加少量 lmol/L 的 NaOH)。7. Verhoeff 液 常用于固定眼球,固定 48h 后,即可脱水。配制方法:36%~38% 甲醛溶液 10ml,95% 乙醇 48ml,蒸馏水 36ml,苦味酸1g。合森医学专业承接包埋HE、IHC、 IF, Tunel、 WB、FISH、特殊染色、整体课题动物、细胞实验、组织芯片等各种实验服务。合森医学,忠您所托!编辑于 2023-04-27 14:26・IP 属地安徽病理学组织学​赞同 15​​添加评论​分享​喜欢​收藏​申请转载​文章被以下专栏收录病理技-1.4 %����

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specificationsConcentrationParaformaldehyde 4%For Use With (Equipment)MicroscopeGradeFluorescence GradeProduct LineImage-iT™Product TypeParaformaldehydeQuantity10 x 10 mLSolution TypeParaformaldehydeFor Use With (Application)Immunocytochemistry (ICC), Immunohistochemistry (IHC), and Immunofluorescence (IF)Shelf LifeExpiration date available on product labelFormLiquidUnit Size10 x 10 mLSave to listCatalog NumberI28900Unit Size10 x 10 mLProduct TypeFixativeConcentrationParaformaldehyde 3%, Glutaraldehyde 0.35%Price (USD)Contact Us ›Full specificationsConcentrationParaformaldehyde 3%, Glutaraldehyde 0.35%For Use With (Equipment)MicroscopeGradeFluorescence GradeProduct LineImage-iT™Product TypeFixativeQuantity10 x 20 mLSolution TypeParaformaldehydeFor Use With (Application)Immunocytochemistry (ICC), Immunohistochemistry (IHC), and Immunofluorescence (IF)Shelf LifeExpiration date available on product labelFormLiquidUnit Size10 x 10 mLSave to listCatalog NumberI28700Unit Size100 mLProduct TypeFixativeConcentrationGlyoxal 3%Price (USD)Contact Us ›Full specificationsConcentrationGlyoxal 3%For Use With (Equipment)MicroscopeGradeFluorescence GradeProduct LineImage-iT™Product TypeFixativeQuantity2 x 50 mLSolution TypeGlyoxalFor Use With (Application)Immunocytochemistry (ICC), Immunohistochemistry (IHC), and Immunofluorescence (IF)Shelf LifeExpiration date available on product labelFormLiquidUnit Size100 mLSave to listCatalog NumberFB002Unit Size20 mLProduct TypeFormaldehydeConcentrationFormaldehyde 4%, Methanol-freePrice (USD)Contact Us ›Full specificationsConcentrationFormaldehyde 4%, Methanol-freeProduct LineImage-iT™Product TypeFormaldehydeQuantity20 mLSolution TypeFormaldehydeFor Use With (Application)Fluorescent Protein, GFP, RFP, Other Small Dye FluorophoreUnit Size20 mLSave to listShowing 5 of 5Catalog NumberSpecificationsUnit SizeProduct TypeConcentrationPrice (USD)R37814Full specifications5 x 20 mLFormaldehydeFormaldehyde 4%, Methanol-freeContact Us ›ConcentrationFormaldehyde 4%, Methanol-freeProduct LineImage-iT™Product TypeFormaldehydeQuantity5 x 20 mLSolution TypeFormaldehydeFor Use With (Application)Fluorescent Protein, GFP, RFP, Other Small Dye FluorophoreUnit Size5 x 20 mLI28800Full specifications10 x 10 mLParaformaldehydeParaformaldehyde 4%Contact Us ›ConcentrationParaformaldehyde 4%For Use With (Equipment)MicroscopeGradeFluorescence GradeProduct LineImage-iT™Product TypeParaformaldehydeQuantity10 x 10 mLSolution TypeParaformaldehydeFor Use With (Application)Immunocytochemistry (ICC), Immunohistochemistry (IHC), and Immunofluorescence (IF)Shelf LifeExpiration date available on product labelFormLiquidUnit Size10 x 10 mLI28900Full specifications10 x 10 mLFixativeParaformaldehyde 3%, Glutaraldehyde 0.35%Contact Us ›ConcentrationParaformaldehyde 3%, Glutaraldehyde 0.35%For Use With (Equipment)MicroscopeGradeFluorescence GradeProduct LineImage-iT™Product TypeFixativeQuantity10 x 20 mLSolution TypeParaformaldehydeFor Use With (Application)Immunocytochemistry (ICC), Immunohistochemistry (IHC), and Immunofluorescence (IF)Shelf LifeExpiration date available on product labelFormLiquidUnit Size10 x 10 mLI28700Full specifications100 mLFixativeGlyoxal 3%Contact Us ›ConcentrationGlyoxal 3%For Use With (Equipment)MicroscopeGradeFluorescence GradeProduct LineImage-iT™Product TypeFixativeQuantity2 x 50 mLSolution TypeGlyoxalFor Use With (Application)Immunocytochemistry (ICC), Immunohistochemistry (IHC), and Immunofluorescence (IF)Shelf LifeExpiration date available on product labelFormLiquidUnit Size100 mLFB002Full specifications20 mLFormaldehydeFormaldehyde 4%, Methanol-freeContact Us ›ConcentrationFormaldehyde 4%, Methanol-freeProduct LineImage-iT™Product TypeFormaldehydeQuantity20 mLSolution TypeFormaldehydeFor Use With (Application)Fluorescent Protein, GFP, RFP, Other Small Dye FluorophoreUnit Size20 mLShowing 5 of 5Save to listImage-iT Fixative Solutions are ready-to-use fixative solutions provided in various formats to meet a variety of research needs. They are ideal for use with fluorescent proteins, such as GFP and RFP, and other small dye fluorophores. No more mixing of toxic fixative powders or dilution of concentrated solutions with non-optimal pH.  Just add these fixative solutions to cells/tissue and incubate for 10-15 minutes at room temperature. They are ideal for use with any antibody-based detection method, including immunocytochemistry (ICC), immunofluorescence (IF), and immunohistochemistry (IHC).Features of Image-iT Fixative Solutions include:• Ready-to-use• High-purity, imaging-grade fixatives with minimum background signal artifacts• Methanol-free• Optimized for secondary antibody labeling, fixed-cell dye staining, and colorimetric IHC4% Formaldehyde or Paraformaldehyde Fixative Solutions4% formaldehyde and paraformaldehyde are the most commonly used fixatives for immunocytochemistry (ICC), immunofluorescence (IF), and immunohistochemistry (IHC).  Image-IT™ Paraformaldehyde 4% in 0.1M Phosphate Buffer pH 7.4 (Cat. No. I28800), is provided in ten vials pack with 10 mL each. Image-iT™ Formaldehyde 4% in PBS is provided in 20 mL size (Cat. No. FB002) or 5 x 20 mL size (Cat. No. R37814). Paraformaldehyde/formaldehyde 4% in 0.1 M phosphate buffer has ∼300 mOsm less osmolarity than in PBS, which helps maintain cellular morphology before the fixative has a chance to fix the inner cellular compartments. For paraformaldehyde/formaldehyde in PBS or phosphate buffer, just add the fixative to cells and incubate for 5-10 minutes at room temperature. Wash the cells in PBS after incubation and proceed to the blocking step.Paraformaldehyde 3%, Glutaraldehyde 0.35% Fixative Solution3% paraformaldehyde with 0.35% glutaraldehyde is a ready-to-use solution provided in methanol free, 0.1 M sodium cacodylate buffer. Yuan Qin, et al. (1) found that a mixture of paraformaldehyde and glutaraldehyde can preserve mitochondrial morphology better than either one alone.Paraformaldehyde is small molecule that penetrates cells/tissue quickly, fixing proteins and other molecules in place. Glutaraldehyde is a bigger molecule with two reactive aldehyde groups that increase the potential for fixation and help create long chains of glutaraldehyde, generating a matrix. This ability helps preserve localization of proteins in complex environment such as mitochondria.To fix cells/tissue, 5–10 minutes of incubation at room temperature is recommended. With glutaraldehyde, increased autofluorescence can be observed due to increased presence of reactive aldehyde groups. To help reduce this autofluorescence, approximately seven minutes of incubation with 0.1M glycine or freshly prepared 0.1% (w/v) sodium borohydride is recommended after fixation but before blocking.Glyoxal 3% Fixative SolutionGlyoxal is a smaller molecule then formaldehyde or glutaraldehyde. It penetrates cells/tissue quickly, fixing the proteins, and preserving the cellular morphology better then formaldehyde (2). Glyoxal 3% Fixative Solution is a ready-to-use fixative solution provided in two separate bottles: Component A (92 mL) and Component B (8 mL), containing absolute Ethanol, Glyoxal Solution, Acetic Acid and water. Mix solution A and solution B in a empty vial, vortex the two solutions together and bring to a pH of 4.5 with the addition of 1M NaOH. Once mixed, this solution must be used immediately. To fix the cells/tissue, incubate cell/tissue at room temperature for approximately 10 minutes. References1: Qin Y, Jiang W, Li A, Gao M, Liu H, Gao Y, Tian X, Gong G. The Combination of Paraformaldehyde and Glutaraldehyde Is a Potential Fixative for Mitochondria. Biomolecules. 2021 May 10;11(5):711.2: Richter KN, et al. Glyoxal as an alternative fixative to formaldehyde in immunostaining and super-resolution microscopy. EMBO J. 2018 Jan 4;37(1):139-159.FiguresDocuments & DownloadsCertificatesSearch by lot number or partial lot numberSearchRequest a CertificateFrequently asked questions (FAQs)Citations & ReferencesSearch citations by name, author, journal title or abstract textSearch

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​目录 简介 细胞培养样品的固定方法 ​组织样品的固定方法 ​冷冻切片固定查看 PDF 格式的实验方案您也可以通过手机访问 Abcam App 获取我们最常用的实验方案,Abcam App 可提供多种实验方案、技术支持和实用工具,方;便现场科研工作者随时随地访问。更多信息。简介固定技术在固定抗原的同时保留细胞和亚细胞结构。固定方法的选择取决于表位和抗体本身的灵敏度,并且可能需要一些优化。我们可使用交联剂(例如多聚甲醛)进行固定。交联剂更有利于保持细胞结构,但可能降低某些细胞组分的抗原性,因为交联会阻断抗体的结合能力。此时可能需要进行抗原修复,特别是固定时间较长或使用较高浓度的交联固定剂时。​细胞培养样品的固定方法​福尔马林 向玻片中加入 10% 中性福尔马林缓冲液 (NPF),静置 10 分钟, 然后用 PBS 洗涤 3 次。如果在福尔马林中固定 10-15 分钟以上,则蛋白质的交联程度将升高并需要进行抗原修复,以确保抗体能自由接近蛋白质,达到结合和检测目的。乙醇 向每个玻片中加入 100–200 μL 95% 乙醇、5% 冰醋酸。 在 -20 ℃ 放置 5-10 分钟,最好置于 Coplins 瓶中, 然后用 PBS 洗涤 3 次。​甲醇   向每个玻片中加入 100–200 μL 冰冷的甲醇、5% 醋酸。   在 -20 ℃ 放置 10 分钟,最好置于 Coplins 瓶中,   然后用 PBS 洗涤 3 次。乙醇和甲醇会使细胞通透化。某些抗原表位对甲醇极为敏感,因为甲醇可能会破坏表位结构。如果出现这种情况,在需要通透化时,可尝试使用丙酮代替甲醇。丙酮   向每个玻片中加入 100–200 μL 冰冷的丙酮。   在 -20 ℃ 放置 5-10 分钟,   然后用 PBS 洗涤 3 次。丙酮也会使细胞通透化,因此不需要额外的通透化步骤。​组织样品的固定方法浸泡固定最常使用 10% 中性福尔马林缓冲液 (NBF)。如果数据表中说明了 IHC-P 是经测试的应用,那么除非另有说明,否则均使用此固定剂。其它固定剂的使用频率较少,例如 Bouin 溶液(多聚甲醛/苦味酸)。理想的固定时间取决于组织块大小和组织类型,但 18-24 小时的固定时间适用于大部分应用。固定不足可能导致边缘染色,即切片边缘具有强信号而中间没有信号。固定过度可能会掩盖表位;抗原恢复可帮助克服此问题,但如果组织的固定时间过长(即超过两天),那么即使进行抗原恢复也可能没有信号。灌注固定对于小组织来说,浸入固定溶液通常能获得足够的固定。但是,如果将固定溶液经由内循环系统(无论是通过心脏或通过腹主动脉)灌注,则往往能获得更快速、更均匀的固定。下文介绍了使用 4% 多聚甲醛固定大鼠的大部分器官的实验步骤。灌注固定中使用的试剂和器具麻醉剂手术用剪刀、镊子和夹钳带精细齿纹的小镊子手术刀带盖的样本瓶 (5–10 mL) 0.9% 生理盐水 500 mL 烧杯4% 多聚甲醛,固定溶液手套、护目镜灌注泵(或置于手术台上方约 150 cm 的倒置烧瓶,内装有固定剂)用于心脏主动脉灌流的带针头短注射器,长度约 50 mm,外径 1.3-1.5 mm带滴注器的灌注套件,类似于静脉输血用品通过心脏灌注固定安装灌注泵;连接灌注套件和灌注针。首先,用约 100 mL 自来水冲洗管道,去除管道中的任何残留物。然后,将灌注管的开口末端放入盛有冷的 4% 多聚甲醛的烧杯(置于冰盒中)中。溶液体积应与动物体重成比例,通常一只动物使用 200-300 mL 固定液已足够。打开阀门,将滴速调整到缓慢、稳定的速度 (20 mL/min),然后关闭阀门。做好手术准备,放置好剪刀、镊子和夹钳。向动物注射适当剂量的麻醉剂。动物麻醉后,将其面朝上放在手术台上。可使用胶带固定动物肢体,将其牢牢固定。使用捏痛反应方法确定麻醉深度。动物必须处于无反应状态,然后才可继续下一步骤。用手术刀在腹部沿隔膜切开。用锋利的剪刀切开隔膜底部的结缔组织,暴露胸壁。将大剪刀钝口朝下,沿着胸壁中线偏左剪开肋骨。在胸壁中心或两端水平剪开,打开胸腔。用夹钳打开胸腔并暴露心脏,排出血液和体液。 用镊子夹住心脏(心脏仍应跳动),将针头直接插入左心室的突起处,并向上延伸约 5 mm。注意,不要将针头插入太深,避免刺穿内壁、破坏溶液循环。将针头固定在插入点附近。打开阀门,使 0.9% 生理盐水溶液以 20 mL/min 左右的速度缓慢、稳定地滴入。用锋利的剪刀剪开心房,确保溶液能够自由流动。如果液体未自由流动,或者液体从动物的鼻腔或口腔流出,请重置针头。血液从身体排空后,将溶液更换为 4% 多聚甲醛溶液 (200–300 mL)。在更换溶液时,小心不要引入气泡。在整个灌注过程中,最好戴上护目镜。 当观察到动物出现自发运动并且肝脏颜色变浅时,灌注基本完成。(通常成年大鼠需要约 30-60 分钟的灌注时间,但具体时间因动物体重和实验技术不同而异。)停止灌注,切下目标组织。将组织放入盛有相同固定溶液的样本瓶中,在冰上或在 4 ℃ 下继续后固定 2 小时,然后进行脱水和包埋。为获得更好的结果,可在 4 ℃ 下浸泡过夜。通过腹主动脉灌注固定按上文所述准备试剂、器具和动物(步骤 1-3)。沿腹部中线切一个长切口,并向两侧延伸,打开腹腔,将肠轻轻移到动物左侧。小心暴露肾动脉起点下的主动脉,并剥离上方覆盖的脂肪和结缔组织。 用带齿纹的精密镊子在离主动脉末端分叉约 0.5-1.0 cm 处紧紧夹住主动脉壁。将弯针头在镊子附近向心脏方向插入主动脉腔中。迅速完成以下连续步骤:     1) 用小剪刀在下腔静脉上剪口2) 开始灌注3) 在肾动脉起点上方夹住隔膜下的主动脉​在进行上述操作时,准确度和速度非常重要,并且固定过程最好由两个实验人员协同完成。灌注开始后,快速夹住动脉非常重要。最方便的做法是用手指(戴手套)将主动脉压到腹腔后壁上,然后用夹钳取代手指施加压力。最后,剪断按压处上方的主动脉。肾表面必须立即变白并显示均匀、苍白的颜色。对于成年大鼠,流速应至少为 60-100 mL/min。灌注 3 分钟。停止灌注,切下并修剪组织。将组织存放在样本瓶中,并浸入相同的固定剂中(后固定步骤),在冰上或 4 ℃ 固定 2 小时。为获得更好的结果,可在 4 ℃ 下浸泡固定过夜。​​   然后,组织可进行脱水和包埋处理。灌注固定疑难解答溶液从动物的窍孔中流出 - 针头未正确插入。​尝试将针头向上插入左心房,使溶液不会流入肺中。注意,不要将针头插入过深,以免穿透内壁。可能需要多练习才能插入正确的位置,因此您可以尝试轻微移动针头,直到溶液不再从动物的鼻腔或口腔流出。固定时间太长 - 固定溶液未正确循环。确保您已将针正确夹在插入点,针孔处没有泄漏,针也没有刺穿心脏。要确认这一点很容易,您可以擦干心脏周围区域,观察固定剂是否泄漏。您也可以尝试重置针头。刺穿心脏 - 灌注固定可能不彻底,并且样品器官/组织可能未正确固定。尝试用夹钳将穿刺伤口封闭。继续灌注,并且在切下器官后,确保将器官置于相同的固定液中 2 小时以上。这种情况下,最好在 4 ℃ 浸泡过夜。如果样品器官是睾丸,在切下后,尝试向尖区(白膜层正下方)内注射一些固定剂,以便固定内部的输精管。如果注射正确,睾丸将轻微膨胀并变硬。如果您能够定位样品器官中的静脉,则可尝试向静脉中手动注射(使用注射器)固定剂。​冷冻切片固定1.       将切片置于包被了 3-氨基丙基三乙氧基硅烷 (APES) 的载片上并封片,然后在气流下风干 30-60 分钟,以尽可能完全干燥切片。2.       将切片保存在 -80 ℃ 下待用。如需获得最佳结果,请立即使用。3.       如有必要,将切片在室温下静置复温 5 分钟。4.       在室温下制备固定剂(丙酮、甲醇或乙醇)。对于新抗体,我们建议使用 3 种载片进行预实验:1) 多聚甲醛2) 丙酮3) 1:1 的丙酮:醇(甲醇或乙醇)溶液5.       用固定剂在室温下固定 15 分钟。6.       用 PBS 冲洗 3-4 次。7.       如果用丙酮固定,则需在气流下风干 30 分钟,以达到完全干燥。8.       按免疫组化染色实验方案继续后续处理。如果用于免疫荧光实验的组织样本需要使用醛固定剂(多聚甲醛、戊二醛等)固定,则需在封闭液中加入 0.3 M 甘氨酸,然后加入一抗。甘氨酸能够结合游离醛基,避免醛基结合一抗和二抗,使背景偏高。当选用戊二醛或多聚甲醛作为固定剂时,易出现游离醛基导致的高背景。查看更多 IHC 实验方案观看简单易懂的实验方案视频。

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碧云天-P0099-500ml-4%多聚甲醛固定液

碧云天-P0099-500ml-4%多聚甲醛固定液

4%多聚甲醛固定液

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产品编号

P0099-500ml

数量

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192.00

产品包装:500ml

10

产品包装:

100ml

500ml

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使用说明

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4%多聚甲醛固定液(4% Paraformaldehyde Fix Solution, 4% PFA Fix Solution)是一种广泛用于免疫组化

(Immunohistochemistry, IHC)、免疫荧光(Immunofluorescence, IF)、免疫细胞化学(Immunocytochemistry, IC)、流式分析(Fluorescence-activated cell sorting, FACS)等检测时组织、组织切片、细胞等生物样品固定的溶液。本产品配制在PBS溶液中,可直接用于组织或细胞的固定,无需稀释。若需使用低浓度多聚甲醛,可使用PBS按比例稀释。

组织学上,4%的多聚甲醛穿透力强,固定均匀,能使组织硬化,有利于切片。该固定剂造成的组织收缩少,损伤小,较为温和,能很好的保存固有物质,保持组织的抗原性和细微结构。此外,多聚甲醛可用于固定并保存脂肪及脂类物质。

本产品固定效果好、应用广,适用于各种常见细胞或组织的固定,对皮肤、肌肉、内脏等均有良好的固定效果,但主要作用于蛋白质,无法固定尿酸和糖类等。

固定液可使细胞或组织的蛋白质凝固,终止内源性或外源性酶反应,防止组织自溶或异溶,以保持原有结构和形态。对免疫组化而言更有原位保存抗原的作用,避免抗原失活或弥散。固定液种类很多,常见的有多聚甲醛、甲醛、戊二醛、乙醇、丙酮等。其固定原理不同,各有优缺点。目前在科学研究中多聚甲醛应用最广,通过形成分子间的交联从而使细胞或组织的三维结构得以被固定。多聚甲醛是甲醛的聚合物,性质比甲醛稳定,且对抗原的破坏能力弱于甲醛,因此,科学研究中常用多聚甲醛作为固定剂。

本产品经反复测试,可以很好的适用于IHC、IF、IC和FACS等相关检测时样品的固定。

按照每个样品固定时需要1毫升固定液计算,一个包装的本产品可以固定100个或500个样品。

包装清单:

产品编号

产品名称

包装

P0099-100ml

4%多聚甲醛固定液

100ml

P0099-500ml

4%多聚甲醛固定液

500ml

说明书

1份

保存条件:

-20℃保存,一年有效。4℃保存,一个月有效。

注意事项:

本产品放置过久其中的醛基可能会被氧化为酸,使溶液pH降低,从而影响染色。

不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。

多聚甲醛虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过24小时。

多聚甲醛可长期存在于固定过的细胞或组织样品中,固定完成后用适当的洗涤液或水冲洗数小时仍会有残留,因此后续实验结果如果受醛基影响,须尽量洗去残留的多聚甲醛。

醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,4%多聚甲醛固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。

本产品对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:

1. 对于细胞样品,去除培养液后,按照每六孔板一个孔加入1毫升固定液的比例,加入4%多聚甲醛固定液。对于细胞涂片等其它细胞样品,加入固定液的量以充分盖住样品为准。通常室温固定10-20分钟即可,但固定较长时间,例如1-2小时也是可以的。后续需使用适当的洗涤液充分洗涤以去除残留的多聚甲醛。

2. 对组织切片,加入4%多聚甲醛固定液量以充分覆盖切片为准,或使用染色架进行固定。通常室温固定10-20分钟即可完成固定,但切片较厚时可以固定较长时间,例如1-2小时。后续需使用适当的洗涤液充分洗涤以去除残留的多聚甲醛。

3. 对于组织块样品,浸泡入4%多聚甲醛固定液中,室温或4℃浸泡固定2到24小时。建议不超过8小时,除非组织块特别大,难以渗透。固定完成后,放入装有蒸馏水的离心管中清洗,每15-30分钟换一次水,共6-8次,建议在摇床进行,或用流水冲洗1-2小时。随后梯度脱水,进行包埋。如果暂时不包埋可放入70-75%的酒精中保存。

4. 详细的免疫染色操作可以参考我们的相关网页:http://www.beyotime.com/support/immunol-staining.htm。

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